一、為什么要進行生化定標？

因為生化分析儀檢測的數(shù)值是吸光度（A）值，而檢驗報告單顯示的是濃度值（或活力單位）。定標，就是要找出一個參考點，就是一個K值（或F值）。

它是由儀器與試劑狀態(tài)確定下來的,當我們測定一個標本時，無論是用手工的方法或全自動生化分析儀，測出來的值只是一個吸光度，這個吸光度對我們沒有什么意義，我們要把這個吸光度值轉(zhuǎn)化成一個濃度或酶的活性，那就要乘上一個K值（或F值）。

定標，即測定已知濃度（或活力單位）的校準品，根據(jù)生化儀測得的吸光度，進行擬合，得到濃度和吸光度之間的關系曲線—校準曲線，將樣本+試劑反應的吸光度帶入校準曲線，就可以得到濃度。

數(shù)據(jù)擬合又稱曲線擬合，俗稱拉曲線，是一種把現(xiàn)有數(shù)據(jù)透過數(shù)學方法來代入一條數(shù)式的表示方式?？茖W和工程問題可以通過諸如采樣、實驗等方法獲得若干離散的數(shù)據(jù)，根據(jù)這些數(shù)據(jù)，我們往往希望得到一個連續(xù)的函數(shù)（也就是曲線）或者更加密集的離散方程與已知數(shù)據(jù)相吻合，這過程就叫做擬合(fitting)。在數(shù)值分析中，曲線擬合就是用解析表達式逼近離散數(shù)據(jù)，即離散數(shù)據(jù)的公式化。

二、定標類型有哪些？

定標類型通常由試劑廠家提供相應參數(shù)，下列定標類型以AU5800為例。

1、單個濃度標準品定標：標準類型為AB，如GLU、TP、ALB、UA、UREA等項目檢測。計算公式為Y=AX+B，定標時以水作為零點，標準液作為另一點，建立標準曲線。

2、多個濃度標準品定標：定標類型為5AB或6AB,定標品濃度常用倍比稀釋梯度遞減，如APOA1、APOB、LP（a)、CRP、PA等項目檢測。計算公式為樣條函數(shù)法（spline）。

3、兩個濃度標準品定標：定標類型2AB,常用于Hcy、FMN、HDLC、LDLC等項目檢測。計算公式為折線法（polygonal）。

4、MB類型因子: 其實就是人工定標的因數(shù)，也就是手工輸入常數(shù)K值。當選擇MB定標時常數(shù)K必須輸入,常用于連續(xù)監(jiān)測法測定酶類，如ALT、AST、ALP、GGT、CK等項目檢測。

K值分為計算K值和實測K值,以ALT例：先測定在線性范圍內(nèi)每分鐘吸光度的變化（ΔA/min），以U/L代表酶活性濃度時，則可按下式進行計算：

U/L=△A/min×K==△A/min×Vt×1000/(Lp×ε×Vs)
式中Vt：反應總體積（ml）；Vs：樣品體積（ml）；ε：對NADH的毫摩爾吸光系數(shù)6.22；1000：將U/ml轉(zhuǎn)換成U/L Lp：比色杯光徑（cm）。

當條件固定時，從理論上講Vt、Vs和Lp均為固定值，ε值為常數(shù)，所以常數(shù)K是恒定的。

常數(shù)K值的選擇很重要，比值過高雖然測定的線性范圍較寬，但重復性差，反之，雖然精密度好，但線性窄。

K值設置的首先發(fā)點應是測定酶的判斷值或參考值上限，應保證這些值測定的可靠,所以轉(zhuǎn)氨酶的常數(shù)K一般在3000左右。

實測K值是用含有酶項目的定標液實際測出K值。

三、多長時間定一次標合適？

K值的穩(wěn)定性主要取決于儀器與試劑，如果儀器與試劑都十分穩(wěn)定，K值也就穩(wěn)定。

本科室使用的定標液為試劑廠家隨試劑盒配送的單個項目定標液。試劑為開放性試劑，試劑會因新舊試劑混用或載機時間過長，導致試劑空白每天都在變化，所以本科室生化室項目定標明確規(guī)定每個項目的定標頻率，這樣可避免工作人員忙于檢測樣本，長時間未定標而忽略不易覺察的結(jié)果漂移，可減少室內(nèi)質(zhì)控失控。

1、速率法項目如ALT、AST、CK等項目大多用水空白定標，水空白定標易操作，每天定一次；

2、室內(nèi)質(zhì)控較穩(wěn)定的的項目如TP、ALB、GLU等項目每周定標一次分天進行。如周一定標TP、ALB、UREA、CREA、UA；周二定標GLU、Fe、Ca、P、CO2。因上述項目需加定標液才可定標，有些定標液還需倍比稀釋，如采取每天所有項目定標會導致開機后準備時間過長，不能及時檢測樣本。

3、室內(nèi)質(zhì)控不穩(wěn)定的項目,如Hcy，采取隔天定標一次，以保證室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果在控。

4、室內(nèi)質(zhì)控失控項目排除儀器、質(zhì)控品、試劑加錯等原因外，追加該項目定標。

5、試劑換新批號需追加該項目定標。

6、儀器進行較大的維修、維護與保養(yǎng)或者更換了重要部件，可能影響檢測性能，需重新對所有項目定標。

四、定標失敗常見原因有哪些?

1、定標所用的比色杯報警錯誤，比色杯透光率不合格，原因是比色杯有污物附著，如果清洗比色杯后仍然報錯，需考慮更換比色杯。

2、添加試劑時未混勻或混勻不足導致定標失敗。

3、重復性不好，定標品沒有混勻或者試劑穩(wěn)定性較差，可通過精密度實驗排查原因。

4、試劑因載機時間過長細菌繁殖造成污染，常見于HDLC或LDLC試劑污染后會由無色變?yōu)槊黠@可見的藍黑色。污染試劑取出，放入新試劑后重定標。

5、試劑是否放置錯誤，重新放置正確試劑。

6、定標液是否開瓶時間過長細菌污染造成定標不過或定標不準確。

7、定標液賦值不準確，在實際工作中會遇到個別項目反復定標室內(nèi)質(zhì)控仍失控，排除儀器、試劑等因素外，可采取系數(shù)校正、對定標液重新賦值等措施糾正為在控，可采取方法如下：

（1）采用酶法測定的項目（ALT、AST、GGT、ALP）可以通過調(diào)整其計算因子K來達到目的。新的計算因子K=（質(zhì)控液靶值/質(zhì)控實際測量值）*計算因子K（現(xiàn)在的）。改完之后，再重新做質(zhì)控，看看質(zhì)控是否在控。

（2）或在設置測試項目參數(shù)界面,相關系數(shù)（Correlation Factor）：利用直線方程Y=AX+B，進行斜率A和截距B的修正，儀器分別默認為1和0，需要修改其中的A值。新的A=（質(zhì)控液靶值/質(zhì)控實際測量值）*A（現(xiàn)在的），改完之后再重新做質(zhì)控，看看質(zhì)控是否在控。